体外循环血路/液路是血液透析器、血液透析滤过器、血液滤过器及血液浓缩器配套使用的一次性耗材，管路与患者血液长时间直接接触，细菌内毒素残留水平与热原反应风险密切相关。本检测以鲎试剂法为核心，内容涵盖适用对象与范围、内毒素特性与检测原理、供试液制备、凝胶法与光度法测定、灵敏度与干扰试验及结果判定，供产品质量控制与放行检验参考。
适用对象与范围
本检测适用于与血液透析器、血液透析滤过器、血液滤过器及血液浓缩器配套使用的一次性体外循环血路和液路成品，涵盖动脉段与静脉段管路、泵管、滴壶、输液口、注药口、采样口及各类连接接头，亦透析液供给管路。检测对象为灭菌交付状态的产品，方法依据《中国药典》细菌内毒素检查法及医用输液、输血、注射器具生物学试验方法的通用要求。注册检验、周期性放行检验、灭菌工艺确认及原材料变更评估均可采用本方法。
细菌内毒素特性与检测原理
细菌内毒素为革兰阴性菌细胞壁的脂多糖成分，耐热性强，常规热压灭菌难以将其灭活。其进入血液循环后可诱发热原反应，故须以专项试验加以控制。鲎试剂含有自鲎血细胞提取的C因子、B因子、凝固酶原与凝固蛋白原，脂多糖与C因子结合后启动酶促级联反应，依次激活B因子与凝固酶，水解凝固蛋白原生成交联凝胶，据此可定性判定内毒素的存在。光度法则追踪反应体系的浊度变化，或以显色合成底物为指示，底物水解释放的生色团吸光度与内毒素浓度对应，可完成定量测定。
样本类型与供试液制备
供试液以淋洗法或浸提法制备。在洁净条件下取灭菌交付的完整血路或液路，以细菌内毒素检查用水充满管腔，使液体覆盖全部内表面，密闭后恒温浸提规定时间，合并流出液即得供试液。液路部分应按临床使用流路串联后统一制备。所用容器与器具须经去热原处理，操作全程佩戴无粉手套，防止外界微生物及内毒素污染。同批淋洗水设空白对照，供试验有效性核查。
鲎试剂凝胶法与光度法测定
凝胶法将供试液与鲎试剂等体积混合于无热原试管，恒温垂直孵育后翻转观察，凝胶形成且不变形者判为阳性。每次试验须设阴性对照、阳性对照与供试品阳性对照。光度法分动态浊度法、终点浊度法、动态显色法与终点显色法，以细菌内毒素工作标准品配制不少于三个浓度的标准曲线系列，基于分光光度法连续监测浊度或吸光度，由回归方程计算内毒素含量。两类方法互为补充，光度法灵敏度更高并支持批量检测。重组C因子荧光法属技术发展趋势，可减少对天然鲎试剂的依赖。
灵敏度、回收率与干扰试验
鲎试剂使用前须复核灵敏度，以细菌内毒素工作标准品配制2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度系列，实测灵敏度与标示值的偏差应符合规定方可使用。供试液基质可能抑制或增强酶促反应，须开展干扰试验：向供试液中添加已知量内毒素，制成供试品阳性对照。根据添加内毒素的检出量计算回收率，回收率处于规定区间（通常为50%～200%）表明基质无实质干扰。若存在干扰，可在最大有效稀释倍数限度内稀释供试液，或调整pH值、改用高灵敏度试剂后重新验证。
结果判定与应用场景
结果判定以对照试验有效为前提：阴性对照管不得形成凝胶，阳性对照与供试品阳性对照均应呈阳性。凝胶法中供试液两管均为阴性时，判定该批产品内毒素符合规定；出现可疑结果时按规程复试确认。光度法将回归计算的内毒素含量与产品技术要求限值比较，不超过限值即判符合。本检测广泛用于血路与液路的批放行检验、注册检验与定型检验，亦服务于灭菌工艺确认、材料变更再评价以及临床热原反应的溯源调查。